Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现胰脏自身特异性到显现1型冠心病诊疗病征的实质性率在学童时期就有更好的说明了，多个胰脏自身特异性特征性的学童之后有70%在肝脏转换后10年内患上冠心病，而随访15年的学童这一%-增大到84%。相较之下，占诊疗1型冠心病一半以上的型1型冠心病的胃癌机制还无法得不到必要的科学研究。

越来越多的人开始常用不应于系统来界定1型冠心病的实质性：个基底在显现多种胰脏自身特异性时转至第1期中，显现血糖异常时转至第2期中，显现病征时转至第3期中。一些多发胰脏自身特异性特征性的个基底，在1期和2期，实质性较快，并发展为胃癌的1型冠心病。我们之后说明了了一组成员在首次检查到多种胰脏自身特异性筛选后将近10年无冠心病的太快实质性者，这组成员病症次数少，但特征非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T细胞核反应加成在实质性较快的病症之后基本不存在，但在近期胃癌和肇因的冠心病病症之后很容易检查到。这意味著暗示，与实质性病症相较，这些病症致病加成的调节大幅提高。

早期科学研究暗示，尽管调节性T细胞核反应(Treg)数量正常，但冠心病病症存在一些功能缺陷，其之后除此以外对IL-2的加成能力提高。此外，冠心病病症之后的波动CD4+T细胞核反应意味著对调节更具抵抗性，平庸为波动T细胞核反应的诱发逼近，连续性产生的Treg和基底外产生的正向Treg，以及抗原漫长的CD4+T细胞核反应之后IL-2加成逼近。本科学研究的目标是说明了了CD4+调节性T细胞核反应(Treg)在一小群极较快实质性者之后的特征，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

分析方法：BOX科学研究是一项以年轻人为基础的侧向科学研究，在21岁以下出有院的病症亲族之后检查1型冠心病的小心因素。我们之后说明了了长期较快实质性者的特征，他们维持多重胰脏自身特异性特征性大约10年，但无法显现冠心病的诊疗病征，快性或非顺利完成性致病。随后，10名继续维持无冠心病并愿意共享大量基底液筛选的较快实质性者归入T和B细胞核反应功能分析。在以外的科学研究之后，8名快实质性者(SP组成员)，之后位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身特异性特征性。所有的与会者都属于1型冠心病实质性的1期，尽管一些人随后失掉了胰脏自身特异性对某些抗原的特征性加成，然而，一名病症已经属于2期将近6年，但无法显现诊疗病征，一名病症被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集筛选筛选时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在科研人员之后对该丝氨酸顺利完成了基本上指标。复合外周血单个核反应细胞核反应(PBMCs)，采用多参数流式细胞核反应精和T细胞核反应诱发试验车指标丝氨酸之后Treg的频磬、变异和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、比如说和回归)顺利完成无监督聚类分析，指标Treg变异。

结果：与身基底健康丝氨酸相较，来自快实质性基底的知觉CD4+T细胞核反应的监督聚类辨识，转录的知觉CD4+ Treg频磬增大，与止痛药正向的TNFR就其蛋白(GITR)突显增大有关。一名HbA1c升高的病症与实质性较快者和反之亦然的控制组成员相较，Treg磬有所各不相同。功能分析暗示，与身基底健康丝氨酸相较，来自较快实质性基底的Treg转录的CD4+波动T细胞核反应诱发值得注意受损。平庸为对波动CD4+T细胞核反应CD25和CD134突显的诱发增大。

示意图1 全面性的变异分析辨识，CD4+Treg亚型在快实质性链表之后增大。由FlowSOM转化成的Treg室，周围在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞核反应上。根据记号物突显比对出有10个元簇:知觉T细胞核反应_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核反应;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核反应;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)常用9个各不相同Treg记号转化成的10个元簇的MST。每个节点代表者一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在节点组成员周遭绘图。每个节点之后的饼示意图暗示单个记号的突显级别。(b)每个元聚类的热示意图，以辨识总基底记号突显。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转化成示意图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的孔洞。(e-l)相对于金属量为每个metacluster罐线或示意图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核反应(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核反应(l)。红色格子代表者捐献者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 常用CITRUS的预测模型得出有论据，Treg频磬的增大是实质性较快的图标。分级就其联(a - f)和大豆分析(g-k)相对SP与会者和反之亦然的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞核反应上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的传奇色彩示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR突显顺利完成复合，各种类型FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(白点)组成员以及丝氨酸SP 606(红色)之后CD25+ cd127的频磬综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+就其联闭包的罐线或示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3突显数值着色，箭头值得注意有的簇被辨认为SP和HD链表之间的各不相同。(j)罐线或示意图辨识了在SP(白点)和HD(灰点)组成员之后，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对于金属量(%-)。(k)直方示意图辨识每个簇的变异(粉红色)和Treg记号相对于突显与背景突显(蓝色);上列，闪存Treg_3;后面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇之后记号的突显有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

示意图3 与身基底健康献血者相较，实质性较快者知觉treg的GITR增大。每个知觉CD4+T细胞核反应元簇(知觉T细胞核反应_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核反应;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核反应;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个突显记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的突显热示意图(sp606不除此以外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之后所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR突显串联，辨识直方示意图(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(红色)所有丝氨酸除此以外，p< 0.05(蓝色)丝氨酸SP 606和反之亦然的HD不除此以外在测试之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之后GITR突显，从分级就其联，从所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)串联，辨识直方示意图(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

示意图4 来自较快实质性的CD4+ treg细胞核反应控制波动CD4+T细胞核反应的能力提高。SP组成员用蓝色的线或和格子暗示，HD组成员用黑色的线或和格子暗示，红色的线或/格子暗示丝氨酸sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核反应顺利完成分选。CD4+CD25−(不接收者者)被记号为CFSE, Treg按检视的%-高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠转化细胞核反应，培育出有3同月顺利完成流式细胞核反应精检查。(a-d)与CD4+不接收者者相对于不应的treg培育出有(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不接收者者培育出有。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE诱发比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发比例。常用特征性对照(转录的响不应细胞核反应不含treg)计算诱发比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

示意图5 波动CD4+T细胞核反应对较快实质性的T细胞核反应转化的诱发更引人注意。SP组成员用蓝色的线或和格子暗示，HD组成员用黑色的线或和格子暗示，红色的线或/格子暗示丝氨酸sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核反应顺利完成分选。CD4+CD25−(不接收者者)被cfsel记号，treg按检视的%-高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠转化细胞核反应，培育出有3同月顺利完成流式细胞核反应精(CD25反染)和细胞核反应因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606不接收者者联合培育出有。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE诱发三份(b)。(c,d) CD25诱发三份(c)和CD134诱发三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出有之后的突显。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

论据：我们得出有的论据是，来自较快实质性子的转化知觉CD4+Treg在GITR突显之后得不到了扩展和丰富，突显了大幅度科学研究Treg在1型冠心病后果个基底之后的异质性的重要性。

文中出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28